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  • 氨基酸分析儀檢測透明膠質類中的游離氨基酸

    2023-09-27



    摘要

    本品為Tau、Glu、Gly、Val、Cysteine等5種氨基酸配制而成的透明膠質類物質,使用Biochrom30+全自動氨基酸分析儀,對其所含的游離氨基酸組分及含量進行分析,并了解對該樣品高溫滅菌前后,所含氨基酸的具體影響。結果表明該未知樣中氨基酸各單個氨基酸含量的濃度,及高溫滅菌前后的分別見附頁結果表。

    大昌華嘉是一家專注于亞洲地區,在市場拓展服務領域處于領先地位的集團。大昌華嘉致力于幫助其他公司和品牌拓展在消費品、醫藥保健、特色原料、科技事業領域的業務。大昌華嘉的服務范圍包括采購、市場研究與分析、市場營銷與銷售、配送與物流以及售后服務。公司在瑞士證券交易所上市,在全球35個市場營運,擁有33,000名專業員工, 2018年銷售凈額為113億瑞士法郎。大昌華嘉于1865年成立,憑借深厚的瑞士傳統背景,公司在亞洲開展業務歷史悠久, 深深植根于亞太地區的社會和企業界。大昌華嘉科技事業部專注于為特定的行業應用領域提供全面的解決方案。2018年該業務單元擁有1,220名員工,凈銷售額為4.121億瑞士法郎。    

    大昌華嘉(大昌洋行(上海)有限公司)是一家專注于亞洲地區,在市場拓展服務領域處于領先地位的集團。大昌華嘉致力于幫助其他公司和品牌拓展在消費品、醫藥保健、特色原料、科技事業領域的業務。大昌華嘉于1865年成立,憑借深厚的瑞士傳統背景,公司在亞洲開展業務歷史悠久,深深植根于亞太地區的社會和企業界。
    大昌華嘉儀器部專業提供分析儀器及設備,代理眾多歐美先進儀器,產品范圍包括:顆粒,物理,化學,生化,通用實驗室的各類分析儀器以及流程儀表設備,在中國的石化,化工,制藥,食品,飲料,農業科技等諸多領域擁有大量用戶,具有良好的市場聲譽。我們的業務逐年增加,市場不斷擴大。大昌華嘉公司在中國設有多個銷售,服務網點,旨在為客戶提供全方位的產品和服務。


    一、樣品前處理

    1、所用試劑

    1.1 Loading Buffer:鋰鹽系統,pH 2.2

    1.2 磺基水楊酸溶液:取50g磺基水楊酸溶于1L純水中

    1.3 乙二胺四乙酸二鈉溶液:取10g EDTA-Na溶于1L純水中

    1.4 0.06mol/L 鹽酸:取50mL 鹽酸加水稀釋至10mL,混勻

    1.5 5種氨基酸標準品、Cystine單標


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    2、前處理設備

    1) 分析天平:精度為 0.0001g

    2) 移液槍及槍頭

    3) 0.22um濾膜

    4) 一次性注射器

    5) 低范圍pH試紙


    3、樣品制備(參考NY/T 1975-2010)

    因樣品為透明膠質類物質,且可能含有未知大分子等雜質,故需(參考NY/T 1975)進行除蛋白前處理:

    吸取2 mL樣品于10 mL離心管或試管中,準確加人2 mL磺基水楊酸溶液(1.2),混勻,放置1h。準確加入1 mL EDTA-Na溶液(1.3)和1 mL鹽酸溶液(1.4),混勻,離心15 min(或用0.45um的微孔濾膜過濾)。吸取上清液(或濾液)1 mL(測定當前pH,若有需要則可加少許的Loading Buffer (1.1),使氨基酸濃度處于儀器檢測范圍內),移液槍取上述溶液1mL至一次性注射劑,過濾膜,上機待測。


    二、分析方法描述(Biochrom 30+)

    氨基酸分析儀分析方法參數:

    1) 色譜柱:Biochrom Li型陽離子交換樹脂柱,4.6*20cm

    2) 分離程序:

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    3) 運行時間:經分析時間+再生時間 168.15min

    4) 反應單元溫度:135°C。

    5) 檢測波長:570nm、440nm同時檢測。

     

    三、樣品中氨基酸含量的計算

    樣品測定液氨基酸的含量按式(1)計算:

    C= Cs/As × Ai× F ················· (1)式中:

    Ci ———樣品測定液氨基酸i的含量,單位為納摩爾每毫升(nmol/mL);

    Cs ———氨基酸標準工作液氨基酸s的含量,單位為納摩爾每毫升(nmol/mL);

    A———試樣測定液氨基酸i的峰面積;

    As ———氨基酸標準工作液氨基酸s的峰面積;

    F ———樣品稀釋倍數。


    附:透明膠質類物質中,高溫滅菌前后比較的游離氨基酸,分析圖譜及做樣結果:

    由結果可知:高溫滅菌之后的游離氨基酸含量,相較于滅菌前會有少許提升。這是由于滅菌前的樣品中可能含有的少許干擾物質或雜菌,存在經過高溫滅菌等的處理會被破壞,釋放少許的氨基酸的可能,屬合理正?,F象。


    圖1.  樣品A--滅菌前—Tau、Glu、Gly、Val+Cystine

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    圖2.  樣品B--滅菌后—Tau、Glu、Gly、Val+Cystine

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